一、SZ61 體視顯微鏡的技術(shù)特點(diǎn)與觀察優(yōu)勢

• 立體觀察能力：采用伽利略光學(xué)系統(tǒng)，提供 10:1 連續(xù)變倍（放大倍數(shù)通常為 6.7×~45×），可直觀呈現(xiàn)孢子排列的三維空間關(guān)系。

• 工作距離：長工作距離（約 110mm），適合放置培養(yǎng)皿、載玻片等樣本，避免物鏡觸碰樣本。

• 照明方式：

• 透射光（底部光源）：適合透明或淺色孢子樣本（如載玻片制片）。

• 反射光（頂部光源）：適合不透明樣本（如菌落表面的孢子層），可增強(qiáng)立體感。

二、孢子樣本的制備與預(yù)處理

（一）適合體視顯微鏡的樣本類型

1. 未制片樣本（直接觀察）

• 培養(yǎng)皿中的真菌菌落：直接置于載物臺上，觀察菌落表面孢子堆的排列（如曲霉的孢子頭、青霉的帚狀分支）。

• 自然基質(zhì)上的真菌（如果實(shí)、葉片霉斑）：剪下病斑部位，直接放置觀察。

2. 簡易制片方法（保持排列完整性）

• 膠帶粘取法：

• 載玻片壓片法：

1. 取少量菌落置于載玻片，滴加無菌水或乳酸酚棉藍(lán)。

2. 用另一載玻片輕壓樣本，使孢子層分散但不破壞排列，沿水平方向推開多余液體。

3. 用透明膠帶（無菌）輕壓菌落表面，粘取孢子層。

4. 膠帶粘面朝下貼于載玻片，滴 1 滴甘油（防止干燥），蓋上蓋玻片（避免氣泡）。

（二）染色與對比度增強(qiáng)

• 適用場景：當(dāng)孢子與菌絲顏色相近或背景復(fù)雜時(shí)，可采用：

• 乳酸酚棉藍(lán)染色：同上，使孢子呈藍(lán)色，背景透明（適合透射光觀察）。

• 印度墨汁負(fù)染：孢子周圍背景變黑，突出無色孢子的輪廓（適合反射光觀察）。

三、孢子排列方式的觀察步驟與特征解析

（一）顯微鏡操作流程

1. 參數(shù)調(diào)節(jié)

• 先將變倍旋鈕調(diào)至最低倍數(shù)（6.7×），放置樣本后緩慢調(diào)大倍數(shù)。

• 調(diào)節(jié)雙目鏡間距至雙眼視野重合，通過屈光度調(diào)節(jié)環(huán)（目鏡兩側(cè)）消除重影。

• 透射光與反射光可同時(shí)開啟，通過光強(qiáng)旋鈕和濾光片（如磨砂玻璃）減少反光。

2. 三維觀察技巧

• 旋轉(zhuǎn)載物臺或移動樣本，從不同角度觀察孢子排列的空間分布。

• 調(diào)節(jié)焦距旋鈕，逐層聚焦（因體視顯微鏡景深大，可觀察到不同深度的孢子層）。

（二）常見孢子排列方式與典型特征

四、圖像記錄與定量分析

1. 拍攝參數(shù)優(yōu)化

• 使用顯微鏡配套數(shù)碼相機(jī)或手機(jī)連接目鏡拍攝，開啟防抖功能。

• 反射光下可搭配黑色背景板，突出孢子排列的立體感；透射光下調(diào)節(jié)亮度至孢子顏色飽和。

2. 定量分析指標(biāo)

• 排列密度：在低倍鏡下選取 1mm2 區(qū)域，統(tǒng)計(jì)孢子數(shù)量及聚集程度。

• 空間分布模式：用繪圖軟件標(biāo)記孢子位置，分析是否符合隨機(jī)、均勻或集群分布。

• 特征測量：通過軟件標(biāo)尺測量孢子鏈長度、孢子頭直徑、孢子間距等（需在相同放大倍數(shù)下）。

3. 動態(tài)觀察應(yīng)用

• 定時(shí)拍攝同一區(qū)域，記錄孢子排列隨培養(yǎng)時(shí)間的變化（如曲霉孢子頭從形成到崩解的過程）。

五、注意事項(xiàng)與問題解決方案

• 樣本變形控制：

• 膠帶粘取時(shí)避免用力按壓，防止孢子鏈斷裂；壓片法力度適中，避免孢子擠壓變形。

• 反光干擾處理：

• 反射光過強(qiáng)時(shí)，可在光源前加磨砂紙或使用環(huán)形偏光鏡，減少菌落表面光澤影響。

• 重疊孢子分辨：

• 通過調(diào)節(jié)焦距，聚焦不同深度的孢子層，或拍攝多層圖像后用軟件合成全景圖。

• 污染風(fēng)險(xiǎn)預(yù)防：

• 觀察真菌樣本時(shí)需佩戴手套，樣本后用 75% 酒精擦拭載物臺，避免交叉污染。

六、延伸技術(shù)：結(jié)合 SZ61 的立體觀察優(yōu)勢

• 熒光輔助觀察（需配件）：若配備熒光模塊，可對熒光標(biāo)記的孢子（如 GFP 標(biāo)記）進(jìn)行三維定位。

• 顯微操作聯(lián)用：利用長工作距離，搭配顯微針在觀察狀態(tài)下挑取單個(gè)孢子或孢子鏈（用于單孢分離）。

• 三維重建分析：拍攝多層焦平面圖像后，用 Imaris 等軟件重建孢子排列的三維模型，量化空間分布參數(shù)。