以下是使用奧林巴斯 CX43 顯微鏡觀察細菌革蘭氏染色菌落的詳細操作指南，結合該型號顯微鏡的特點（如光路設計、物鏡配置等）進行調整，供參考：
一、奧林巴斯 CX43 顯微鏡特點
物鏡配置：通常配備 4×（低倍）、10×（低倍）、40×（高倍）、100×（油鏡）物鏡，適合微生物形態(tài)觀察。
柯勒照明系統(tǒng)：提供均勻光源，需提前調節(jié)以優(yōu)化視野亮度和對比度。
載物臺：機械移動平臺，可精準調節(jié)標本位置。
目鏡：10× 目鏡（默認），可配合物鏡計算總放大倍數(shù)（如 100× 油鏡下總放大倍數(shù)為 10×100=1000 倍）。
二、觀察前準備
1. 標本與試劑
已完成革蘭氏染色的細菌涂片（需干燥、固定良好）。
香柏油（用于油鏡觀察）、無水乙醇或二甲苯（清潔鏡頭）、擦鏡紙。
2. 顯微鏡檢查與調節(jié)
亮度調節(jié)：
打開電源，通過光源亮度旋鈕調節(jié)至合適亮度（通常低倍鏡用稍弱光，油鏡用強光）。
若使用自然光，需調整反光鏡（CX43 可能配備電光源，無需手動調節(jié)反光鏡）。
柯勒照明調節(jié)（關鍵步驟，提升圖像清晰度）：
放置標本于載物臺，低倍鏡（10×）下找到視野。
關閉聚光器光圈，調節(jié)聚光器高度，使光圈邊緣清晰成像。
調整聚光器位置旋鈕，使光圈中心與視野中心重合。
緩慢打開光圈至邊緣略超出視野，避免眩光。
三、觀察步驟（從低倍到油鏡）
1. 低倍鏡觀察（10× 物鏡）
操作：
將涂片放在載物臺，用壓片夾固定，移動平臺使標本對準通光孔中心。
轉動粗準焦螺旋，緩慢下降鏡筒至物鏡接近涂片（肉眼觀察距離，避免碰撞）。
邊觀察目鏡邊緩慢上升鏡筒，直至看到模糊菌落，再用細準焦螺旋調清晰。
觀察重點：
定位菌落分布區(qū)域，觀察菌落整體形態(tài)（如圓形、不規(guī)則形）、大小、邊緣特征（光滑、鋸齒狀）、顏色（革蘭氏染色后呈紫色或紅色）。
移動載物臺，選擇單個或密集菌落作為下一步觀察目標。
2. 高倍鏡觀察（40× 物鏡）
操作：
在低倍鏡下找到目標后，直接轉換 40× 物鏡（注意避免物鏡碰撞涂片）。
僅用細準焦螺旋微調焦距（若視野模糊，可輕微調節(jié)聚光器高度或光圈大小改善對比度）。
觀察重點：
放大菌落細節(jié)，觀察表面質地（光滑、粗糙、黏液狀）、透明度（透明、半透明、不透明）、是否有色素產生（如綠色、黃色菌落）。
初步區(qū)分革蘭氏陽性菌（紫色）和陰性菌（紅色）的菌落區(qū)域。
3. 油鏡觀察（100× 物鏡，需用油鏡油）
操作：
高倍鏡下將目標移至視野中央，升高載物臺約 2 cm（或直接轉換油鏡）。
在涂片中央滴 1 滴香柏油，緩慢轉動油鏡使其浸入油滴中（貼近但不壓涂片）。
邊觀察目鏡邊緩慢下調載物臺（或微調細準焦螺旋），直至菌體清晰成像（若視野過暗，可調大光圈或增加光源亮度）。
觀察重點：
細菌個體形態(tài)：
球菌：球形，排列方式（單個、成雙、鏈狀、葡萄狀）。
桿菌：桿狀，長短、粗細、兩端形態(tài)（鈍圓、平截）、是否有芽孢。
弧菌 / 螺旋菌：彎曲或螺旋狀（需結合具體菌種）。
革蘭氏染色結果：
革蘭氏陽性菌：細胞壁含厚肽聚糖層，染色后呈藍紫色。
革蘭氏陰性菌：細胞壁含脂多糖層，脫色后復染呈紅色。
特殊結構（若有）：莢膜（透明暈圈）、鞭毛（需特殊染色）、芽孢（折光性強的圓形 / 橢圓形結構）。
四、結果記錄與分析
1. 繪圖記錄
繪制菌落形態(tài)示意圖，標注革蘭氏陽性菌（紫色區(qū)域）和陰性菌（紅色區(qū)域）。
繪制細菌個體形態(tài)圖，注明排列方式（如 “葡萄球菌”“鏈桿菌”）和染色結果。
2. 文字描述
菌落特征：
“菌落直徑約 2-3 mm，圓形，邊緣光滑，革蘭氏陽性菌菌落呈深紫色，表面濕潤有光澤；革蘭氏陰性菌菌落呈粉紅色，邊緣不規(guī)則，質地較粗糙?！?/span>
菌體特征：
“油鏡下可見革蘭氏陽性球菌呈葡萄串狀排列，直徑約 1 μm，藍紫色；革蘭氏陰性桿菌呈短桿狀，散在分布，長約 2-3 μm，粉紅色，部分菌體可見未著色的芽孢結構?！?/span>
五、注意事項
鏡頭保護：
油鏡使用后立即清潔：用擦鏡紙蘸取少量無水乙醇或二甲苯，輕輕擦拭油鏡鏡頭（單方向擦拭，避免來回摩擦），再用干凈擦鏡紙擦干。
嚴禁用普通紙巾或手直接擦拭鏡頭。
防壓片操作：
轉換物鏡時需肉眼觀察鏡頭與涂片距離，避免碰撞導致玻片碎裂或鏡頭損傷。
光源管理：
觀察完畢后關閉光源，長時間不用需拔電源，延長燈泡壽命。
生物安全：
染色后的涂片若含活菌，需經(jīng)高壓滅菌后丟棄，避免污染。
六、常見問題與解決方法
問題 可能原因 解決方法
視野模糊 焦距未調好 / 光圈過大 細準焦螺旋微調；縮小光圈提升對比度
菌體顏色過淺 染色時間不足 / 脫色過度 重新染色或更換合格標本
油鏡下視野黑暗 光源不足 / 香柏油未鋪滿 調亮光源；補滴香柏油覆蓋觀察區(qū)域
高倍鏡下找不到目標 低倍鏡未定位好中心區(qū)域 返回低倍鏡重新定位，移動至視野中央
通過以上步驟，可利用奧林巴斯 CX43 顯微鏡清晰觀察細菌革蘭氏染色后的菌落形態(tài)及菌體特征，結合染色結果輔助微生物鑒定。
